DNA抽出

実験

DNA抽出（マウスの尾から）

試薬

1M Tris-HCl (pH8.0, 100ml) 1M Tris-HCl (pH7.5, 100ml)

• Tris 12.11g
• HCl 4.2ml (pH8), 6.5ml (pH7.5)
• milliQ 100mlくらい
• TrisをmilliQ（約80ml）に溶かす
• HCｌをpHが既定の値に達するまで加える
• milliQを100mlまで加えてメスアップ
• オートクレーブ

0.5M EDTA (100ml)

• Na2EDTA.2H2O 18.61g
• NaOH pellet 約2g
• milliQ 100ml (だいたい)
• pHが8になるまでNaOH　pelletを加える（EDTAはｐH8以下では溶けない）
• milliQでメスアップ

10% SDS (sodium dodecyl sulfate, 100ml)

• electrophoresis grade SDS 10g
• milliQ 100ml (less)
• milliQ90mlにSDSを加える
• 容器を65度のウォータプールに入れる
• 溶けたらmilliQでメスアップ
• オートクレーブは駄目

TE (50ml, ファルコンチューブ)

• 1M Tris-HCl(pH8.0) 500μl
• 0.5M EDTA 10μl
• D.W.でメスアップ

TBS 50ml

• 50mM Tris-Cl （pH7.4-8.0） 2.5ml
• 100mM NaCl 1ml
• 5mM EDTA 0.5ml

Lysis buffer（11.2ml+α）

• TBS 11.2ml
• 10%SDS 560ul
• ProteinaseK 112ul

手順

1. マウスの尾を5mm～1cmカットし、個体ごとにチューブに入れる
2. 各チューブにLysis　Bufferを400ulずつ入れる
3. 55度インキュベータでオーバーナイトで溶かす
4. （クロロホルム処理）
5. 各チューブに100％エタノールを500ulずつ入れる（少し混ぜる）
6. 遠心する（15000rpm、10分）
7. エタノールを取り除き、70％エタノールを入れて洗う
8. 遠心（15000rpm、5分）
9. エタノールをできる限り取り除く
10. フラッシュ遠心
11. エタノールを完全に取り除き、TEを100ul入れる
12. 37度インキュベータでDNAをTEに溶かす