2012年3月13日火曜日

切片作成(100μm,サジタル)

実験

切片作成(100μm,サジタル)

試薬

PBS 500ml
  • 10×PBS 50ml
  • milliQ 450ml

PBST 500ml
  • PBS 500ml
  • Triton X-100 500μl (0.1%)

手順
  1. ブレインマトリックスなどを用いて脳を固定し、両刃剃刀正中面を切断
  2. マイクロスライサーで脳を切断していく(しっかりと固定する)
  3. スピードは遅め、振動数は多めのほうがきれいに切れる
  4. 切断した切片はPBSに入れておく
  5. 切片をスライドに乗せる
  6. シャーレにPBSTを満たす
  7. 鉛筆やシャーペンなどでスライドに必要事項を書く
  8. 筆をうまく使ってスライドガラスに切片を乗せる
  9. しばらく乾かす
  10. (染色を行わない場合)Immu-Mountとカバーガラスで包埋
  11. (薄く切らなかった脳を保存する場合)スクロースに置換。PFA→15%スクロース→30%スクロース

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