切片作成(100μm,サジタル)
試薬 PBS 500ml- 10×PBS 50ml
- milliQ 450ml
- PBS 500ml
- Triton X-100 500μl (0.1%)
- ブレインマトリックスなどを用いて脳を固定し、両刃剃刀正中面を切断
- マイクロスライサーで脳を切断していく(しっかりと固定する)
- スピードは遅め、振動数は多めのほうがきれいに切れる
- 切断した切片はPBSに入れておく
- 切片をスライドに乗せる
- シャーレにPBSTを満たす
- 鉛筆やシャーペンなどでスライドに必要事項を書く
- 筆をうまく使ってスライドガラスに切片を乗せる
- しばらく乾かす
- (染色を行わない場合)Immu-Mountとカバーガラスで包埋
- (薄く切らなかった脳を保存する場合)スクロースに置換。PFA→15%スクロース→30%スクロース
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